请问三聚氰胺如何检测 [复制链接]

三鹿事件：三聚氰胺检测方法汇总 食品中三聚氰胺分析手册 超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺 GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺 三鹿事件：三聚氰胺检测方法汇总

看了几个三聚氰胺的检测方法，都有些类似，翻译了一个用LC/MS/MS检测的. 原文在这里

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下面是整个PDF的部分，基本上把主要的都翻译成了中文。这个方法和FDA的方法大致类似，只是FDA的方法比较老，而这个方法是FERN(food emergency response network)，应该翻译成食品紧急反应网吧，在2006年12月份做的一个检测方法。比较新。所以翻译。 最近我正研究测定三聚氰胺，比较难测，但是还不至于到不可测定的地步。今天看了新闻，和我之前想的一样，是收奶过程中引入的三聚氰胺。好了，看正文吧。有液质联机的幸福了。 文章分为以下几个部分：

A 介绍 B 设备 C 试剂和溶液 D 标准物 E 样品准备 F 分析程序 G 筛选标准 H 安全信息和预防措施 I 质量评估计划 K 附件 L 许可和授权

下面就是翻译的正文了。 A 介绍 1、原理 三聚氰胺用乙腈和水混合从肌肉组织提取，提取物通过与二氯甲烷液液交换，之后通过固相萃取柱净化，用5%氢氧化铵/甲醇溶液洗脱，蒸发干燥，和内标重溶50%乙腈/水溶液。通过LC/MS/MS(液相色谱/质谱/质谱)分析。 2、适用范围 本方法适用于甄选三聚氰胺含量大于等于50ppb得猪肉和家禽肉。 3、结构

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B 设备 注意：以下所列，可用相当设备替换。 1、 器皿 a 分析天平，0.1mg灵敏度，型号味A120S，Sartorious公司 b 上皿式天平，0.01g灵敏度，Mettler公司 c 带15ml离心管的离心机，国际设备公司 d 带50ml离心管的离心机，同上 f 离心管 15ml玻璃，一次性，上端螺纹，Kimble公司，货号73785 g 离心管 玻璃，一次性，15ml，16×100mm，Kimble公司，货号73500 16100 h A类量筒，25ml，100ml，500ml i 均质机 j 可调移液器，100ul~10ml，Eppendorf k 1ml注射器 l 氮吹仪 m 巴斯德习惯 n 反复吸管-大容量液体移液器(repipetters-bottle top dispensers)，0~25ml和1~10ml有机型 o 混合气，水平震动，2速 Eberbach公司 p 固相萃取柱 Strata X-C, 60mg,，3ml，Phenomenex公司 q 药匙，不锈钢 r 注射瓶，Teflon涂层 s 3ml，一次性注射器 t 注射器过滤微孔滤膜，0.45um u 试管架 v 真空多支管设备，固相萃取柱用 w A类容量瓶 50ml、1L x 漩涡振荡器，可调速度 2、 设备 a HPLC Waters Alliance 2695 b 质谱，Waters 串联四级杆 c 色谱柱，Phenomenex SynergiTM 反相柱(150×4.6mm；4um粒径) C 试剂和溶液 注意：下面所列试剂和溶液可被相当试剂替代。 1、试剂 a 乙酸，质谱纯 b 乙腈， 色谱纯 c 乙酸铵，质谱纯 d 氢氧化胺，30% e 盐酸 f 甲醇，色谱纯 g 二氯甲烷，色谱纯 h 超纯水，10M欧姆。 2、溶液 a 乙腈水混合液，体积比1：1 b 冲洗溶液，乙腈和水各半，无需精确 d 1N HCl d 0.1N HCl e 5% 氢氧化胺甲醇溶液 f 流动相A（25mM乙酸铵/25mM乙酸溶于水中）： D标准 注意：注意：下面所列试剂和溶液可被相当试剂替代。 1、 来源 a 三聚氰胺，货号M2659，Aldrich公司 b 15N3三聚氰胺（内标），货号IN5451,ICON服务 2、储备液 a 三聚氰胺储备液,100ug/ml b三聚氰胺工作液,1ug/ml c 15N3三聚氰胺内标 d 校正曲线 浓度 等同单位 三聚氰胺工作液（1ug/ml） 定容体积 稀释液，乙腈水溶液(1:1, V/V) 0ng/ml 0ppb 500ul 500ul 500ul 125ng/ml 25ppb 125ul 500ul 375ul 250ng/ml 50ppb 250ul 500ul 250ul 500ng/ml 100ppb 500ul 500ul 0ul 2、 储存和稳定性 储存于2-8℃，稳定性未测试 E 样品准备 肌肉样品取出多余脂肪后，切成小块，使用食品匀浆机粉碎。将粉碎样品转移到塑料袋中，储存在零下20℃。部分溶解样品优先分析。 F 分析程序 注意：避免塑料接触。 1、 肉样准备 a 称5.00±0.05g样本，放入50ml离心管中。同时做空白。 b 加入250ul的1ul/ml三聚氰胺工作液，作为50ppb的阳性对照。 c 加入25ml的乙腈水混合液(1:1, V/V)。 d 高速匀浆30s~60s。 e 3500g离心10分钟 f 吸取5ml的提取液到50ml玻璃离心管中 g 加110ul的1N的HCL，旋涡振荡混合 h 加10ml的二氯甲烷 i震荡2min j 3500g离心10分钟，或静止分层 k，弃去上层水层 l 加2.5ml到50ml到上述管中 m震荡2分钟 n 3500g离心10min，或静止分层 o小心除去上层 p拧紧盖，旋涡振荡10s q 3500g离心10分钟 r清洁spe用多支路萃取器 s用5m甲醇和水预洗SPE柱 t将样品加入SPE柱 u用0.1N的HCl 2ml，1ml甲醇洗柱，弃去清洗液 v 抽真空1min w 用5ml，浓度5%得氢氧化胺/甲醇溶液淋洗柱子，收集淋洗液与试管中 x 清洗氮吹仪 y 50~60℃吹干 z 加入100ul的乙腈水溶液和100ul的内标工作液 aa 漩涡震荡样品，超声至少1min，以全部溶解残余物 bb 过0.45滤膜，放到样品瓶中，待测。 2、 仪器设置 注意：下面仪器参数可能是最优的。 a HPLC条件 Ⅰ 流动相A：25mM的乙酸铵/25mM的乙酸的水溶液 Ⅱ 流动相B：乙腈 Ⅲ 流动相C： 甲醇 Ⅳ 流速：0.5ml/ml Ⅴ 梯度 时间，分钟 %A %B %C 0.0 80 15 5 5.0 30 65 5 5.1 5 90 5 7.0 5 90 5 7.1 80 15 5 12.0 80 15 5 Ⅵ 进样量：50ul Ⅶ 柱温：25℃ b 接口条件 Ⅰ 极性：正 Ⅱ 离子源：EI Ⅲ 源温度：125℃ Ⅳ 脱溶剂温度：450℃ Ⅴ进样锥气体流速：20L/hour Ⅵ 脱溶剂气流速: 900L/hour 质谱多反应监测参数： Ⅰ Resolution Q1 &Q3 Unit Ⅱ 锥形电压： 35V Ⅲ Dwell time: 0.2sec Ⅳ 三聚氰胺跃迁： (a) m/z 127→85 27eV碰撞电压 (b) m/z 127→68 17eV碰撞电压 Ⅴ 15N3三聚氰胺跃迁 (a) m/z 130→87 17eV碰撞电压 样品色谱图见原文

三聚氰胺的检测方法 1 三聚氰胺的性质    三聚氰胺简称三胺, 别名蜜胺、氰尿酰胺, 分子式:C3N6H6, 分子量: 126.12, 是一种重要的氮杂环有机化工原料。物理性能: 白色结晶粉末, 无味, LD50( 半数致死量) :4550 mg/kg(小鼠经口); 3000 mg/kg(大鼠经口), 相对密度:1570 kg/m3。熔点: 在常压下, 354℃分解。升华温度:300℃。溶解性: 能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶; 微溶于水、乙醇; 不溶于乙醚、苯和四氯化碳。水溶液呈弱碱性。化学性能: 三聚氰胺显弱碱性, 能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。在强酸或强碱液中, 三聚氰胺发生水解, 胺基逐步被羟基取代, 生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物。其中三聚氰胺与甲醛水溶液的反应是最重要的反应。 2 饲料原料中混入三聚氰胺的原因分析   很多饲料厂控制饲料原料时, 基于条件所限, 常用凯氏定氮方法测定粗蛋白的含量, 因为凯氏定氮只能测出含氮量而无法测出氮的来源, 加上蛋白质原料价格比常规的谷物原料要高很多, 为谋取不当得利和弥补饲料原料中蛋白含量低的问题, 不法商人常常加入非蛋白原料, 如工业尿素、二脲等非蛋白氮而冒充粗蛋白质。对于加入尿素以及尿素类成品可以通过检测氨氮的方法检测出来, 而三聚氰胺不溶解在水里, 抗氨氮测定, 所以一般的饲料分析化验部门也很难分析出来。有时在化验一些蛋白质原料时, 蛋白质含量高, 而氨基酸含量低, 也可能是加入三聚氰胺。另外, 三聚氰胺含氮量为66.6%, 折合成粗蛋白含量为416.27%, 掺入少量就可以迅速提高蛋白含量。加上三聚氰胺为白色粉末, 易被染色, 很容易混入原料中而不被发现。三聚氰胺通常被掺入蛋白饲料中, 如大豆蛋白粉、鱼粉、肉骨粉、玉米蛋白粉以及饼粕类原料等。三聚氰胺是一种有机化工产品, 不是国家许可的饲料和食品添加剂, 加入饲料原料中对人和动物产生的危害也在进一步研究中。 3 三聚氰胺的检测方法     工业上测定三聚氰胺的纯度通常采用苦味酸法和升华法。苦味酸法方法原理: 将水加入试样, 加热溶解后, 加人苦味酸溶液, 称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量, 即测得三聚氰胺纯度含量。分析步骤: 称取试样, 置于500 ml 锥形瓶中, 同时加入水, 加热溶解; 冷却后, 加入酚酞指示液3 滴, 若显色, 加入硫酸溶液, 直至溶液颜色消失, 若有不溶物, 需过滤, 水洗; 把滤液和洗液合并, 移人500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔细振摇混合后, 准确吸取100 ml 置于500 ml 烧杯里; 将此溶液加热至80℃, 另加入已加热至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷却至室温后, 保持在15℃以下约8 小时; 用已恒重的玻砂过滤器过滤, 之后,先用约100 ml 苦味酸三聚氰胺的饱和溶液洗涤, 再用水洗; 烘干玻砂过滤器, 置于干燥器中冷却后, 称量求得沉淀物质量。升华法测定原理: 在升华装置中将试样在负压下进行加热, 让三聚氰胺完全升华后, 称其残渣量, 即测得三聚氰胺纯度。分析步骤: 称取试样, 置于预先干燥了的且已知质量的试样容器里; 将试样容器置入减压升华装置内,待完全密闭后, 开启真空装置缓缓吸引, 并调节装置内的 温度, 经2 小时升华结束; 取出试样容器, 冷至室温后, 称量试样容器的质量。上述两种测定方法准确度均较高, 但操作繁琐, 分析时间太长,有人推荐采用电位滴定法。具体测定方法, 首先测定三聚氰胺溶液中总固体的含量, 称取样品于200 ml烧杯中, 加入100 ml 蒸馏水, 放于石棉网的电炉上加热,在沸腾的情况下搅拌溶液, 使试样完全溶解。在电磁搅拌状态下, 用硫酸标准溶液滴定热溶液至pH 值为5 左右。流水冷却溶液至室温, 滴定, 每次准确加入0.1 ml 硫酸标液,并记下相应的pH 值, 直至pH 值约为3。计算出等当量点时消耗硫酸标液的体积。结果计算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 为溶液中三聚氰胺的含量, %; S 为溶液中总固体的含量, %; V 为等当量点时消耗硫酸标液的体积, ml; F 为0.5 mol /L 硫酸标液的校正系数; m 为滴定时所标取总固体的质量; 6.307 为换算系数) 。

三聚氰胺的样品前处理及最新LC-MS检测方法：ASB亲水色谱柱 北京艾杰尔科技有限公司 开发的三聚氰胺的样品前处理及最新LC-MS检测方法：ASB亲水色谱柱 三聚氰胺的样品前处理及最新检测方法 张俊燕，何吕兴 （北京艾杰尔科技有限公司，北京，100085） 摘 要 三聚氰胺是一种重要的化工材料，常用于制造三聚氰胺树脂，是建筑业中常用的防火材料，本来与食品、饲料行业毫不相干，但是发生在美国的数起饲料致死宠物的事件使两者联系在一起。经过调查，发现这些进口饲料中含有一定浓度的三聚氰胺，对此，美国食品药品监督管理局（FDA）要求饲料厂商提供三聚氰胺的检测报告，因此，三聚氰胺事件也使得分析领域掀起了检测方法的开发热潮，艾杰尔科技有限公司具有较高的敏感度，迅速开发了优越的检测方法，本文将详细论述。 关键词 三聚氰胺， 样品前处理，LC-MS 1 前言 三聚氰胺事件变成社会热点话题是在07年3月份，美国大量召回被三聚氰胺污染的宠物饲料，起因于宠物饲料致死猫狗的事件。据不完全统计，北美地区仅美国因食用有毒饲料而死亡的宠物就有上万只, 相关投诉不计其数，美国食品药品管理局调查显示，在回收的宠物食品、 死亡动物的尿液结晶和肾脏细胞中都发现有三聚氰胺，研究人员还发现, 回收宠物食品所用的小麦谷蛋白添加物中有较高浓度的三聚氰胺存在。尽管国内尚无动物中毒死亡或产生不良反应的报道，对于三聚氰胺的毒性也有些争议，但三聚氰胺不是饲料原料，也不是国家允许使用的饲料添加物。某些不法厂商添加三聚氰胺主要是为了增加产品的表观蛋白质含量，三聚氰胺被广泛的添加到淀粉、谷朊粉、蛋白粉中，致使不仅是饲料生产商，其它的食品工厂也需要三聚氰胺的检测以保证他们产品的安全。 本文采用固相萃取法对样品进行前处理，并对比了不同的检测方法,包括FDA公布的检测方法〔1〕对三聚氰胺分析的影响。 三聚氰胺(melamine)简称三胺, 学名三氨三嗪, 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，分子式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 。分子量：126.12，是一种重要的氮杂环有机化工原料〔2〕。三聚氰胺显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物。三聚氰胺与醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、厨房用具、防火纤维、商业滤膜、胶水和阻燃剂，部分亚洲国家，也被用来制造化肥。 2 材料与试剂 2.1 仪器与条件 Agilent 1100高效液相色谱仪（美国，Agilent公司）；二极管阵列检测器（DAD），检测波长240nm，柱温：40℃。 （1）Agela VenusilTM ASB C18（ 4.6×250mm）；缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠； 流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。 （2）Agela VenusilTM ASB C8（ 4.6×250mm）；流动相：缓冲液：乙腈=85：15；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0；流速：1.0mL/min； 离子交换固相萃取柱Agela ClearnertTM PCX(北京艾杰尔科技有限公司) 2.2 试剂与样品 宠物饲料样品（农业部饲料供应中心提供）；甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供；氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司；三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠（Sigma公司）；甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。 3 实验方法 3.1样品前处理方法 (1) 标准样品配制： 取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。 (2) 提取： 称取饲料样品5g，加入50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。 (3) 净化(PCX小柱，60mg/3mL) ： a) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水 b) 上样：加入提取液3mL c) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。 d) 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。 e) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。 3.2 HPLC检测方法 3.2.1 三聚氰胺HPLC-UV检测方法 三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDA）的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔(Agela) ASB系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果，分析色谱图如下： 图2 Venusil ASB 色谱柱分离三聚氰胺的谱图 (a) 色谱柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm；标准：FDA方法；流动相：缓冲液：乙腈=85：15；缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0；流速：1.0mL/min；柱温：40 oC；波长：240nm (b) 色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm；标准：中国农业部颁标准方法；缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠； 流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱温：40℃；波长：240nm 空白加水平（mg/L） 回收率 0.01 116% 0.1 108% 0.5 92% 2 96% 由上表1可以看出：用PCX柱净化样品，可以得到满意的回收率，此方法处理样品，比FDA公布的前处理方法更加准确、可靠。 3.2.2 三聚氰胺LC-MS检测方法 由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，因此限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，不能得到较好的分离定量〔3〕。 基于此问题，艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用艾杰尔(Agela) ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂，可以用于质谱检测。 与FDA 2007年4月公布的《Updated FCC Developmental Melamine Quantitation (HPLC-UV)》相比较，该方法大大降低了最低检测限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm），提高了检测灵敏度。 以该方法分别在ASB-C8 4.6×250mm 　ASB-C18 4.6×250mm 得到的谱图如下： 图3 LC-MS方法检测三聚氰胺的谱图 缓冲液：10mM的NH4AC；流动相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；进样量：样品先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成0.1mg/mL，进10uL；柱温：40℃；波长：240nm 4 结果与讨论 4.1阳离子交换柱(PCX) 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子交换和反相吸附两种机理，并具有以下优点： a) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。 b) 批次重复性好。 c) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。 4.2 LC-MS方法优点： （1）检测过程简便：无须添加离子对试剂，三聚氰胺就可得到良好的保留与分离，避免了配制离子对流动相的复杂过程。 （2）提高了检测的灵敏度：无离子对试剂，可以用于质谱检测器，大大降低了最低检测限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm）。 （3）降低了检测成本：不用离子对试剂，就不再需要买价格较贵的离子对试剂了，从而降低了检测成本。 （4）延长了色谱柱的使用寿命：避免了使用离子对试剂减少色谱柱寿命的影响。 （5）该方法所使用的色谱柱具有通用性：无论是用FDA方法、中国农业部部颁标准方法和本公司开发的LC-MS方法，使用艾杰尔(Agela) ASB系列亲水色谱柱均能得到一个很好的检测结果，从而给客户提供了多种选择空间。 参考文献 〔1〕 W.C.Andersen, S.B. Turnipseed, Determination of Melamine Residues in Catfish Tissue by Triple Quadrupole LC-MS-MS with HILIC Chromatography. Laboratory Information Bulletin. vol. 23, No. 4396 ,2007, 〔2〕 D.W. Hamilton, P.A. O’Neal, Analytical methods for the quantification of free melamine and cyanuric acid in Nylon 6/6,6 copolymer. J. Sep. Sci., vol.26, pp.510–514,2003. 〔3〕 J.V. Sancho, M. Ib´a˜nez, Residue determination of cyromazine and its metabolite melamine in chard samples by ion-pair liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. vol.530,pp. 237–243,2005.

固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺 王浩 刘艳琴 曹红 杨红梅 刘小力 闫龙宝国家食品安全监督检验中心,北京100083摘　要:三聚氰胺（melamine）为白色或无色结晶，通常用于塑料制品中合成树脂的生产，在高温和酸性条件下能引起三聚氰胺转移到食品中。近来，一些不法厂商将三聚氰胺添加到宠物食品中导致宠物死亡，引起广泛关注。因此，如何快速、准确地分析食品中的三聚氰胺成为食品企业，食品监管机构和广大民众密切关注的问题。本实验利用阳离子交换-反相萃取柱净化样品提取液，结合高效液相色谱对宠物食品中三聚氰胺进行测定，获得较满意的结果。[第一段] 关键词:高效液相色谱 宠物食品 三聚氰胺 固相萃取 测定 阳离子交换 合成树脂 塑料制品

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三聚氰胺掺假蛋白食品的筛选珀金埃尔默公司摘　要:本文提供了一种分析三聚氰胺及其类似物的耐用、有效且确定性方案。除优化的GC／MS方法外．还讨论了样品准备方案．包括堤取和衍生等。[编者按] 关键词:三聚氰胺 蛋白食品 GC／MS方法 筛选 掺假 样品准备 类似物 衍生

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三聚氰胺的检测方法 侯艳丽[1] 张惠茹[1] 刘来亭[1] 兰尊海[2][1]河南工业大学生物工程学院,河南郑州450052 [2]郑州牧业工程高等专科学校分析中心摘　要:最近美国发生了许多宠物猫狗非正常死亡事件，经过调查确认是宠物食品的原料受三聚氰胺污染造成的。为认清、了解以及鉴别三聚氰胺，本文对三聚氰胺的性质、用途和检测方法做一综述。[第一段] 关键词:三聚氰胺 检测 死亡事件 宠物食品 宠物猫 狗

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饲料中三聚氰胺残留量高效液相色谱测定的研究 辜雪英 吴小花 仇满珍南昌理工学院,南昌330002摘　要:建立了饲料中三聚氰胺残留量的高效液相色谱分析方法,样品经反相柱分离后采用波长为245nm的紫外检测器进行检测,该方法具有准确、快速、高效的特点.三聚氰胺在1.0μg/～50μg/mL浓度范围内线性良好,相关系数为0.9996,回收率范围在94.75%～102.9%,相对标准偏差为2.92%～5.38%.[著者文摘] 关键词:三聚氰胺 残留 食品

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食品及饲料中三聚氰胺残留量液相色谱检测方法的研究 李德良江西科技师范学院,江西南昌330038摘　要:建立了食品及饲料中三聚氰胺残留检测的反相高效液相色谱方法。样品经乙腈水或甲醇水提取，离心分离，过0．2m滤膜，然后采用RP-HPLC-UV法测定，外标法定量。时色谱分离每件进行了优化，三聚氰胺在0．05g／mL-10．0g／mL范围内线性良好，相关系数为0．99994。在4．0mg／kg-80．0mg／kg浓度范围内．平均加标回收率在90.5%-102．7%之间，相时标准偏差为2．96%-3．62%，方法的最低检出限为5mg／kg。该方法简便、快速．满足食品及饲料中三聚氰胺残留量的检验工作需要。[著者文摘] 关键词:残留分析 三聚氰胺 食品 饲料 高效液相色谱法

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高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺含量 张美金 林海丹 林峰 李荀 徐惠金广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广州510623摘　要:目的：建立高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺含量的方法。方法：样品经盐酸溶液提取，离心后取5ml上清液于预平衡的Waters Oasis MCX固相萃取柱净化，进行HPLC分析。结果：校准曲线在0．05～1．0mg／L的范围内，相关系数r〉0．999。饲料和宠物食品中三聚氰胺的定量检测限（LOQ）是1．0mg／kg；添加水平为1．0mg／kg时，样品加标回收率为81％～105％，RSD〈10％。结论：方法简便可行，净化效果好，检测灵敏度、准确度及精密度均满足检测要求。[著者文摘] 关键词:三聚氰胺 饲料 固相萃取 高效液相色谱法 分类号:　O657.72[著者标引]文献标识码：A文章编号：1004-8685（2007）12-2205-03栏目信息：化学测定方法 相关文献:主题相关 全文快照　　　 Determination of melamine in feedstuff and pet food by high performance liquid chroma-tographyZhang Mei-jin,Lin Hai-dan,Lin Feng,Li Xun,Xu Hui-jin Guangdong Inspection And Quarantine Technology Center, Guangzhou 510623, ChinaAbstract:Objective：To establish a SPE-HPLC method for the determination of Melamine residues in feedstuff and pet food products. Methods：The Melamine in sample was extracted with Perchloric acid. After centrifugation, the 5 ml supernatant liquid was loaded on an preconditioned Waters Oasis MCX cartridge, and detected with HPLC method. Results-The calibration curve was linear in the range 0.05-1.0 mg/kg and r〉0.999. The limit of quantification （LOQ） was 1.0 mg/kg for Melamine residues in feedstuff and pet food, and at the corresponding level of 1.0 mg/L, The recovery rates were 81% - 105% and RSD 〈 10%. Conclusion ：The method is applicable for the detection of Melamine in feedstuff and pet food. The clean-up effect, sensitivity, accuracy and prevision have all met the analysis requirement.[著者文摘] Key words:Melamine ;Feedstuff; Solid phase extraction;High performance liquid chromatography 收稿日期:　2007-09-07修订日期:　基金资助: 作者简介:张美金（1981-），女，大学本科，助理工程师，主要从事食品中农兽药残留检测和仪器分析工作。

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我女儿吃的雅士利奶粉，也不行啊。

合成工艺 三聚氰胺最早被李比希于1834年合成，早期合成使用双氰胺法：由电石（CaC2）制备氰胺化钙（CaCN2），氰胺化钙水解后二聚生成双氰胺（dicyandiamide），再加热分解制备三聚氰胺。目前因为电石的高成本，双氰胺法已被淘汰。与该法相比，尿素法成本低，目前较多采用。尿素以氨气为载体，硅胶为催化剂，在380-400℃温度下沸腾反应，先分解生成氰酸，并进一步缩合生成三聚氰胺。 6 (NH2)2CO → C3H6N6 + 6 NH3 + 3 CO2 生成的三聚胺气体经冷却捕集后得粗品，然后经溶解，除去杂质，重结晶得成品。尿素法生产三聚氰胺每吨产品消耗尿素约3800kg、液氨500kg。 按照反应条件不同，三聚氰胺合成工艺又可分为高压法(7-10MPa，370-450℃，液相)、低压法(0.5-1MPa，380-440℃，液相)和常压法(<0.3MPa，390℃，气相)三类。 国外三聚氰胺生产工艺大多以技术开发公司命名，如德国巴斯夫(BASF Process)、奥地利林茨化学法(Chemical Linz Process)、鲁奇法(Lurgi Process)、美国联合信号化学公司化学法(Allied Signal Chemical)、日本新日产法(Nissan Process)、荷兰斯塔米卡邦法(既DSM法)等。这些生产工艺按合成压力不同，可基本划分为高压法、低压法和常压法三种工艺。目前世界上技术先进、竞争力较强的主要有日本新日产Nissan法和意大利Allied-Eurotechnica的高压法，荷兰DSM低压法和德国BASF的常压法。 我国三聚氰胺生产企业多采用半干式常压法工艺，该方法是以尿素为原料0.1MPa以下，390℃左右时，以硅胶做催化剂合成三聚氰胺，并使三聚氰胺在凝华器中结晶，粗品经溶解、过滤、结晶后制成成品。 相关致病案例 2007年，美国爆发宠物食品受污染事件。事后调查表明：掺杂了≤6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的原因。 2008年9月，中国爆发三鹿婴幼儿奶粉受污染事件，导致食用了受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症，其原因也是奶粉中含有三聚氰胺。 国家质检总局近日紧急在全国开展了婴幼儿奶粉三聚氰胺含量专项检查。此次专项检查对其余109家企业进行了排查，共检验了这些企业的491批次产品。阶段性检查结果显示，有22家婴幼儿奶粉生产企业的69批次产品检出了含量不同的三聚氰胺。 检出三聚氰胺婴幼儿配方乳粉企业名单 　　检出三聚氰胺婴幼儿配方乳粉企业名单序号 标称的企业和产品名称 抽样数 不合格数 三聚氰胺最高含量mg／kg 　　1、石家庄三鹿集团股份有限公司生产的三鹿牌婴幼儿配方乳粉　11　11　2563.00 　　2、上海熊猫乳品有限公司生产的熊猫可宝牌婴幼儿配方乳粉　5　3　619.00 　　3、青岛圣元乳业有限公司生产的圣元牌婴幼儿配方乳粉 17　8　150.00 　　4、山西古城乳业集团有限公司生产的古城牌婴幼儿配方乳粉　13　4　141.60 　　5、江西光明英雄乳业股份有限公司生产的英雄牌婴幼儿配方乳粉　2　2　98.60 　　6、宝鸡惠民乳品(集团)有限公司生产的惠民牌婴幼儿配方乳粉　1　1　79.17 　　7、内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司生产的蒙牛牌婴幼儿配方乳粉　28　4　68.20 　　8、中澳合资多加多乳业(天津)有限公司生产的可淇牌婴幼儿配方乳粉　1　1　67.94 　　9、广东雅士利集团股份有限公司生产的雅士利牌婴幼儿配方乳粉　30　10　53.40 　　10、湖南培益乳业有限公司生产的南山倍益牌婴幼儿配方乳粉　3　1　32.00 　　11、黑龙江省齐宁乳业有限责任公司生产的婴幼儿配方乳粉2段基粉　1　1　31.74 　　12、山西雅士利乳业有限公司生产的雅士利牌婴幼儿配方乳粉　4　2　26.30 　　13、深圳金必氏乳业有限公司生产的金必氏牌婴幼儿配方乳粉　2　2　18.00 　　14、施恩(广州)婴幼儿营养品有限公司生产的施恩牌婴幼儿配方乳粉　20　4　17.00 　　15、广州金鼎乳制品厂生产的金鼎牌婴幼儿配方乳粉　3　1　16.20 　　16、内蒙古伊 利实业集团股份有限公司生产的伊 利牌儿童配方乳粉　35　1　12.00 　　17、烟台澳美多营养品有限公司生产的澳美多牌婴幼儿配方乳粉　6　6　10.70 　　18、青岛索康营养科技有限公司生产的爱可丁牌婴幼儿配方乳粉　3　1　4.80 　　19、西安市阎良区百跃乳业有限公司生产的御宝牌婴幼儿配方乳粉　3　1　3.73 　　20、烟台磊磊乳品有限公司生产的磊磊牌婴幼儿配方乳粉　3　3　1.20 　　21、上海宝安力乳品有限公司生产的宝安力牌婴幼儿配方乳粉　1　1　0.21 　　22、福鼎市晨冠乳业有限公司生产的聪尔壮牌婴幼儿配方乳粉　1　1 0.09 三聚氰胺的违法添加案例 2007年深圳检验检疫局从台湾进口的3批“爱族牌”观赏鱼饲料检出三聚氰胺，且三聚氰胺含量较高，分别为0.35 g/kg 、0.47g/kg 、0.51g/kg。这3批鱼饲料共 846千克，货值1016美元。 2007年福建、天津、山东、珠海检验检疫局从进口马来西亚、泰国、秘鲁的鱼粉（HS编码均为2301201000）中检出三聚氰胺阳性，已依法对进口鱼粉作出 退货处理。 据美国食品药品管理局（FDA）官方消息，美国FDA首次在美国国内生产的饲料中发现含有三聚氰胺，有关企业已经开始自动召回相关产品。含有三聚氰胺的饲料添加剂来自俄亥俄州托莱多市Tembec BTLSR公司和科罗拉多州约翰斯敦市Uniscope公司。Tembec公司生产AquaBond和Aqua-Tec II黏合剂，主要用于出口，同时向Uniscope公司提供生产Xtra-Bond黏合剂的原料，Uniscope公司生产的Xtra-Bond黏合剂主要供应美国市场。上述黏合剂主要用于生产牛、绵羊、山羊、鱼、虾的颗粒饲料。Tembec公司确认，为了增加颗粒饲料的黏性，在产品配方中添加了三聚氰胺。但在美国三聚氰胺禁止用来作为动物或鱼/虾饲料添加剂。 2007年北京检验检疫局从进口澳大利亚的宠物食品（HS编码为2309101000）中检出三聚氰胺阳性，并依法对进口宠物食品作出退货处理。

三聚氰胺（英文名Melamine），是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。简称三胺，又叫2 ,4 ,6- 三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，分子式C3N6H6、C3N3(NH2)3，分子量126.12。 识别 CAS号 108-78-1 PubChem 7955 SMILES Nc1nc(N)nc(N)n1 性质 化学式 C3H6N6 摩尔质量 126.12 g mol-1 外观 白色单斜固体 密度 1.574 g/cm3 熔点 250 °C (523 K) 沸点 升华 在水中的 溶解度 3.1g/L，20°C 若非注明，所有数据都依从国际单位制，以及来自标准状况（25 °C, 100 kPa）的条件。

三聚氰胺的生物学毒性和假蛋白原理 生物学毒性 目前三聚氰胺被认为毒性轻微，大鼠口服的半数致死量大于3克/公斤体重。据1945年的一个实验报道：将大剂量的三聚氰胺饲喂给大鼠、兔和狗后没有观察到明显的中毒现象。动物长期摄入三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。1994年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片也只说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。然而，2007 年美国宠物食品污染事件的初步调查结果认为：掺杂了≤6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的原因，为上述毒性轻微的结论画上了问号。但为安全计，一般采用三聚氰胺制造的食具都会标明“不可放进微波炉使用”。 目前广泛认为三聚氰胺毒性非常轻微，基本上没有肾毒性，但是由于加工过程中的原因使得三聚氰胺中常常混有三聚氰酸，两者紧密结合形成不溶于水的网格结构。摄入人体后由于胃酸的作用三聚氰胺和三聚氰酸相互解离并被分别通过小肠吸收进入血液循环并最终进入肾脏。在肾细胞中两者再次结合沉积从而形成肾结石，堵塞肾小管，最终造成肾衰竭。由于三聚氰胺结石微溶于水，对于成年人，由于经常喝水使得结石不容易形成。但对于哺乳期的婴儿，由于喝水很少并且相比成年人肾脏狭小，造成更容易形成结石，这就是为什么2008年中国婴幼儿奶粉污染事件没有成年人的原因。中国卫生部对于2008年中国婴幼儿奶粉污染事件指导治疗方案中，对于三聚氰胺造成的轻度结石，推荐大量喝水的方法，也是基于这个原理。 假蛋白原理 由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标，因此三聚氰胺也被人称为“蛋白精”。 蛋白质主要由氨基酸组成，其含氮量一般不超过30%，而三聚氰胺的分子式含氮量为66％左右。通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过测出含氮量来估算蛋白质含量，因此，添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。有人估算在植物蛋白粉和饲料中使测试蛋白质含量增加一个百分点，用三聚氰胺的花费只有真实蛋白原料的1/5。三聚氰胺作为一种白色结晶粉末，没有什么气味和味道，掺杂后不易被发现。 奶粉事件：各个品牌奶粉中蛋白质含量为15-20%（晚上在超市看到包装上还有标示为10-20%的），蛋白质中含氮量平均为16%。以某合格牛奶蛋白质含量为2.8%计算，含氮量为0.44%，某合格奶粉蛋白质含量为18%计算，含氮量为2.88%。而三聚氰胺含氮量为66.6%，是牛奶的151倍，是奶粉的23倍。每100g牛奶中添加0.1克三聚氰胺，就能提高0.4%蛋白质。 微溶系指溶质1g(ml)能在溶剂100～不到1000ml中溶解，三聚氰胺在水中微溶，在牛奶这种水包油型的乳液中溶解度未找到实验数据。